Es gibt fast alle Unternehmen, die das verkauft habenBromelain-Enzympulverwird mit Papain gemischt. Es ist schwierig, das Bromelain auf 5000GDU/g zu reinigen. Es ist jedoch sehr einfach, das Papain auf 1000.000 GDU/g zu reinigen. sogar bis zu 2.000.000 GDU/g. Aber die Funktionen von Bromelain unterscheiden sich von denen von Papain. Farbe, Geruch, Wasserlöslichkeit und Geschmack stehen im Kontrast zum gefälschten Produkt und zum echten Produkt. Der Unterschied besteht darin, dass das richtige Bromelain-Enzympulver grau, geruchlos, geschmacklos und wasserunlöslich ist.
Aber das falsche Bromelain hat folgende Eigenschaften:
● Es ist hellgelb, aromatisch und mild süßlich und wasserlöslich. Es ist das Merkmal von Papain.
● Es wird zur Linderung von Entzündungen und zur Schmerzlinderung eingesetzt. aber diese Funktionen gibt es bei Papain fast nicht.
● Es wird nur als Nahrungsergänzungsmittel und nicht als Lebensmittelzusatzstoff verwendet, kann aber durchaus Pharmaqualität haben. Aber Papain wird nur als Fleischzartmacherpulver und in Kosmetika verwendet.
Wir haben das Bromelain mit den Methoden SDS-PAGE-Gel und GELATIN DIGESTION UNIT ANALYTICAL und HPLC getestet. Bei der SDS-PAGE-Gelmethode gibt es weniger Zielmoleküle für gefälschte Produkte.
Nachfolgend finden Sie die Ergebnisse der SDS-Seitenelektrophorese
Die Sprenkel oben zeigen, dass nur das richtige Produkt die gleichen Sprenkel an der richtigen Stelle im Bild aufweist, das gefälschte Produkt jedoch kleine Sprenkel aufweist, was bedeutet, dass das Molekulargewicht kaum sichtbar ist.
Das Molekulargewicht von Bromelain beträgt etwa 33.000, aber das Molekulargewicht von Papain beträgt 21.000. Und das HPLC-Chromatogramm:
Sie werden sehen, dass nur der richtige Extrakt die richtigen Molekulargewichte an Bromelain enthält und mittels HPLC nachweisbar ist.
Aber wenn wir nur mit der Gelatin Digestion Unit Analytical Method (GDU) getestet haben, siehe Anhang II. Sowohl das richtige als auch das falsche Produkt führen zu den gleichen Ergebnissen wie unten:
Ananasstängel sind sehr billig und der Anteil vom Stängel bis zum Bromelain ist sehr gering, so dass es bei der Herstellung zu gewissen Umweltverschmutzungen kommt.
Fast alle Fabriken für Bromelain-Enzympulver befinden sich im Nahbereich. Sie verwenden frische Stängel. Es ist unmöglich, den Stiel über große Entfernungen zu transportieren. Das Rohmaterial sollte so schnell wie möglich gehandhabt werden, wenn es vom Feld gesammelt wird, oder es sollte in einer Umgebung mit niedriger Temperatur (4-8 Grad) gelagert werden, um einen Proteinabbau zu vermeiden. Tatsächlich kann der Hersteller keine der beiden oben genannten Bedingungen erfüllen, da zu viele Ananasstängel vorhanden sind. Die sinnvolle Methode ist ein Gleichgewicht zwischen Bearbeitungszeit und Proteinaktivitätsverlust. Normalerweise erfolgt die Herstellung der rohen Rohstoffe in der Ananas-Erntesaison und die Lagerung der rohen Rohstoffe in einer Umgebung mit niedriger Temperatur (4-8 Grad).
Wir führen einen Test zur SDS-Seitenelektrophorese durch. Theoretisch können wir ihn auf 10,000 oder 20,000 erhöhen, aber es wird sehr teuer sein. 5000 GDU/g und stabilisieren, vielleicht auf einem Malto-Träger/mikroverkapselten oder etwas anderem plus Extraktion/Reinigung in Bio-Qualität.
Anhang I
● Methode 5 SDS-Polyacrylamid-Gelelektrophorese (SDS-PAGE)
SDS-PAGE ist eine Gelelektrophoresemethode mit denaturiertem Polyacrylamid. Das Prinzip der Proteintrennung bei dieser Methode basiert auf der Tatsache, dass sich die meisten Proteine mit dem anionischen Tensid Natriumdodecylsulfat (SDS) in einem Gewichtsverhältnis zu einem Komplex verbinden können
Die von Proteinmolekülen getragene negative Ladung übersteigt die Nettoladung natürlicher Proteinmoleküle bei weitem, wodurch der Ladungseffekt verschiedener Proteinmoleküle eliminiert und Proteine nach ihrer Molekülgröße getrennt werden.
Diese Methode dient der qualitativen Identifizierung, Reinheits- und Verunreinigungskontrolle sowie der quantitativen Bestimmung von Proteinen.
1 Instrumentengerät
Konstantspannungs- oder Konstantstrom-Stromversorgung, vertikaler Plattenelektrophoresetank und Form zur Klebstoffherstellung.
2. Reagenzien
(1) Wasser.
(2) Trenngelpuffer (4x, Lösung A) 1,5 mol/L Trihydroxymethylaminomethan-Salzsäurepuffer. Wiegen Sie 18,15 g Trihydroxymethylaminomethan ab und lösen Sie es mit einer geeigneten Menge Wasser auf. Stellen Sie den pH-Wert mit Salzsäure auf 88 ein und verdünnen Sie mit Wasser auf 100 ml.
(3) 58,0g Acrylamid und 20 g N,N'-Methylenbisacrylamid in 30-prozentiger Acrylamidlösung (B-Lösung) abwiegen, in warmem Wasser auflösen und auf 200 ml verdünnen, mit Filterpapier filtrieren (aufbewahrt in dunkel).
(4) 10 g Natriumdodecylsulfat in 10-prozentiger SDS-Lösung (C-Lösung) abwiegen, in Wasser auflösen und auf 100 ml verdünnen
(5) Kommerzialisierungsreagenz einer Tetramethylethylendiaminlösung (TEMED, D-Lösung).
10-prozentige Ammoniumpersulfatlösung (E-Lösung) 10 g Ammoniumpersulfat abwiegen, in Wasser auflösen und auf 100 ml verdünnen. Es wird empfohlen, es vor der Verwendung vorzubereiten oder es separat 2 Wochen lang bei -20 Grad aufzubewahren.
(7) Konzentrierter Gummipuffer (4 ×, F-Lösung) 0,5 mol/L Trihydroxymethylaminomethan-Salzsäurepuffer, 6,05 g Trihydroxymethylaminomethan abwiegen, eine angemessene Menge Wasser zum Auflösen hinzufügen, den pH-Wert mit Salzsäure auf 6,8 einstellen Säure hinzufügen und mit Wasser auf 100 ml verdünnen.
(8) Elektrodenpuffer (10 ×) 30 g Trimethylaminomethan, 144 g Glycin und 10 g Natriumdodecylsulfat abwiegen, in Wasser auflösen und auf etwa 800 ml verdünnen. Stellen Sie den pH-Wert mit Salzsäure auf 8,1-8,8 ein und verdünnen Sie ihn mit Wasser auf 1000 ml.
(9) Nicht reduzierter Probenpuffer (4 ×) 303 g Trimethylaminomethan, 20 mg Bromphenolblau und 8,0 g Natriumdodecylsulfat abwiegen, 40 ml Glycerin abmessen, in Wasser auflösen und auf etwa 80 ml verdünnen. Stellen Sie den pH-Wert mit Salzsäure auf 68 ein und verdünnen Sie es mit Wasser auf 100 ml.
(8) Elektrodenpuffer (10 ×) 30 g Trimethylaminomethan, 144 g Glycin und 10 g Natriumdodecylsulfat abwiegen, in Wasser auflösen und auf etwa 800 ml verdünnen. Stellen Sie den DH-Wert mit Salzsäure auf 81-88 ein und verdünnen Sie ihn mit Wasser auf 1000 ml
(9) Nicht reduzierter Probenpuffer (4 ×) 3,03 g Trimethylaminomethan, 20 mg Bromphenolblau und 80 g Natriumdodecylsulfat abwiegen, 40 ml Glycerin abmessen, in Wasser auflösen und auf etwa 80 ml verdünnen. Stellen Sie den pH-Wert mit Salzsäure auf 6,8 ein und verdünnen Sie es mit Wasser auf 100 ml.
(10) Reduzierter Testsubstanzpuffer (4 ×) 3,03 g Trimethylaminomethan, 20 mg Bromphenolblau und 80 g Natriumdodecylsulfat abwiegen, 40 ml Glycerin abmessen, auflösen und mit Wasser auf etwa 80 ml verdünnen und hinzufügen - 20ml Mercaptoethanol, pH-Wert mit Salzsäure auf 6,8 einstellen, mit Wasser auf 100 ml verdünnen (oder 3,03 g Trimethylaminomethan, 20 mg Bromphenolblau, 8,0 g Natriumdodecylsulfat, 40 ml Glycerin abmessen, in Wasser auflösen und verdünnen auf 80 ml auffüllen, den pH-Wert mit Salzsäure auf 6,8 einstellen, mit Wasser auf 100 ml verdünnen und vor der Verwendung Dithiothreitol auf 100 mmol/L zugeben.
● Anhang II
Gelatine-Aufschlusseinheit, Analysemethode (GDU)
A. Zweck: Dieses Verfahren dient zur Bestimmung der proteolytischen Aktivität von Bromelain-Enzympulver.
B. Ausrüstung:
1. pH-Meter
2. Wasserbad mit konstanter Temperatur bei 45,0 Grad ± 0,1 Grad
3. Analysenwaage
4. Messkolben
5. Vollpipetten
6. Timer
7. Digitale Bürette (Genauigkeit von 0,1 ml)
8. Abzugshaube
9. Automatische Pipetten
C. Sicherheitsvorkehrungen:
Dieser Test muss im Abzug durchgeführt werden.
1. Nutzen Sie standardmäßige Laborsicherheitspraktiken.
2. Formaldehyd: Vorbereiten und stets unter einem Abzug aufbewahren. Bekanntes Karzinogen und Teratogen.
3. Peroxid: Starkes Oxidationsmittel
D. Reagenzien und Reagenzienvorbereitungen:
1. Destilliertes Wasser: ca. 500 ml: mit 0,1 N HCl auf einen pH-Wert von 4,5 einstellen.
2. Gelatinesubstrat:
A. 25 Gramm Gelatine (Mikrobiologie. 1.04070) in 375 ml heißem Wasser auflösen und zum Kochen bringen. Auf 45 Grad abkühlen lassen.
B. Stellen Sie den pH-Wert mit 0.1 N HCl auf 4,5 ein und verdünnen Sie ihn mit 500 ml destilliertem Wasser mit einem pH-Wert von 4,5.
C. Halten Sie das Gelatinesubstrat bei 45 Grad.
3. Pufferlösung:
A. 15 g NaCl langsam zu 40-50 ml Wasser in einem 150-ml-Becherglas hinzufügen und umrühren, bis es sich auflöst.
B. 0.570 ml Essigsäure hinzufügen.
C. Stellen Sie den pH-Wert mit 0.2N HCL auf 4,5 ein (das Volumen wird größer als 100 ml sein).
4. 3 Prozent Wasserstoffperoxid:
A. Pipettieren Sie 2,5 ml 30-prozentiges Wasserstoffperoxid (Stammlösung) in einen 25-ml-Messkolben und verdünnen Sie es mit destilliertem Wasser mit pH-Wert 4,5 auf das Volumen
5. 37 Prozent Formaldehyd pH 9.0: a. Stellen Sie ein ausreichendes Volumen (100 ml) Formaldehyd mit 0,1 N NaOH auf pH 9,0 ein (ungefähr 20 ml Formaldehyd pro Probe vor der pH-Einstellung).
Analytische Methode der Gelatine-Aufschlusseinheit (GDU) – Forts.
6. 0.100 N NaOH: (standardisiert gekauft) a. Stammlösung: standardisiert auf 0,100 N
E. Vorgehensweise:
1. Enzymvorbereitung:
A. Berechnung der Enzymvorbereitung
Gewicht {{0}}/Zielaktivität (ungefähr 0,05 g oder 50 mg)
A. Wiegen Sie das Enzym genau in einen 50-ml-Messkolben ein
B. 8,3 ml Pufferlösung hinzufügen.
B. 30 Minuten bei Zimmertemperatur stehen lassen.
C. Mit destilliertem Wasser mit pH-Wert 4,5 auf 50 ml verdünnen, einen kleinen Rührstab hinzufügen und weitere 10 bis 15 Minuten rühren
2. Enzymverfahren:
A. Pipettieren Sie 25 ml Gelatinesubstrat in jedes der zwei 100-ml-Bechergläser mit Rührstäben und stellen Sie diese 5 Minuten lang in ein Wasserbad bei 45 Grad, eines für die Testlösung und das andere für die Blindlösung.
B. Testlösung:
1) Geben Sie 1,0 ml Bromelain-Enzympulverlösung in das für die Testlösung vorgesehene Becherglas, starten Sie die Zeitmessung und schwenken Sie.
2) Nach genau 20 Minuten Inkubation bei 45 Grad 0,1 ml 3-prozentiges Wasserstoffperoxid hinzufügen und schwenken.
3) Weitere 5 Minuten inkubieren.
4) Nehmen Sie das Becherglas aus dem Wasserbad und führen Sie unter ständigem Rühren die pH-Sonde ein.
5) Notieren Sie den pH-Wert nach 10 Sekunden (anfänglicher pH-Wert).
6) Mit 0.1 N NaOH auf pH 6.0 einstellen. (Ungefähr 2-4 ml)
*Hinweis: Bei der Einstellung des pH-Werts auf 6.0 seien Sie vorsichtig bei pH 5,8; Der pH-Wert steigt langsam an und geringfügige Zugaben von NaOH zu diesem Zeitpunkt erhöhen den pH-Wert deutlich.
7) Unter ständigem Rühren 10 ml 37-prozentiges Formaldehyd, pH 9,0, hinzufügen.
8) Zeichnen Sie den pH-Wert nach 10 Sekunden und 1 Minute auf.
9) Mit 0.1 N NaOH auf pH 9.0 titrieren.
10) Notieren Sie das Titrationsvolumen.
Dies ist der Testtiter, T. c.
Blindlösung: Die Blindlösung sollte gleichzeitig mit der Testlösung verwendet werden. Dies wird erreicht, indem die Bestimmung der Blindlösung 12 Minuten nach Beginn der Testlösung gestartet wird. Dadurch haben Sie Zeit, den Test mit der Testlösung abzuschließen, bevor Sie mit der Blindlösung fortfahren müssen. 1) Geben Sie 0,1 ml 3-prozentiges Wasserstoffperoxid in das für die Blindlösung vorgesehene Becherglas und schwenken Sie es.
2) Nach genau 20 Minuten Inkubation bei 45 Grad 1,0 ml Bromelainlösung hinzufügen und schwenken.
3) Weitere 5 Minuten inkubieren.
GELATINE DIGESTION UNIT ANALYTICAL METHOD (GDU) – Forts.
4) Nehmen Sie das Becherglas aus dem Wasserbad und führen Sie unter ständigem Rühren die pH-Sonde ein.
5) Notieren Sie den pH-Wert nach 10 Sekunden (anfänglicher pH-Wert).
6) Mit 0.1 N NaOH auf pH 6.0 einstellen. (Ungefähr 2-4 ml)*Siehe Hinweis oben.
7) Unter ständigem Rühren 10 ml 37-prozentiges Formaldehyd, pH 9,0, hinzufügen.
8) Zeichnen Sie den pH-Wert nach 10 Sekunden und 1 Minute auf.
9) Mit 0.1 N NaOH auf pH 9.0 titrieren.
10) Notieren Sie das Titrationsvolumen. Dies ist der Blindtiter B.
F. Berechnung:
1. Definition: Eine Gelatine-Verdauungseinheit ist die Enzymmenge, die nach 20-minütiger Verdauung bei 45 Grad 1 mg Aminostickstoff aus einer Standard-Gelatinelösung bei pH 4,5 oder pH 5,5 (GDU pH 4,5 oder pH 5,5) freisetzt.
GDU/g {{0}} (TB) x 14 x N x 50 Wt (g) Wobei: T=Testtiter (ml 0.1 N NaOH) B=Leertiter (ml 0,1 N NaOH) N=Normalität von standardisiertem NaOH (dh 0,100) Gewicht (g)=Anfangsgewicht des Enzyms
G. Testparameter:
1. Enzympräparate werden auf eine Konzentration von ca. 0,001 g/ml (1 mg/ml) oder bei Bromelain-Enzympulverkonzentrat auf ca. 1-2 GDU/ml verdünnt. Bei jedem Lauf wird ein Referenzmaterial getestet, um die Genauigkeit der Methode sicherzustellen.
Guanjie liefert Bromelainpulver in großen Mengen mithilfe der GDU-Testmethode. Unser Produktionsprozess erfolgt in CGMP-Standardwerkstätten und nutzt drei Produktionslinien in zwei Fabriken und zwei unabhängige Labore. Bei Fragen zu unseren Produkten kontaktieren Sie uns bitte unterinfo@gybiotech.com.